我們在使用細胞工廠培養(yǎng)細胞時細胞生長狀態(tài)受各種因素的影響,這些因素看似不起眼,若不注意就會導致細胞負傷慘重。那么,在使用細胞工廠時的小細節(jié)究竟如何影響細胞生長,在使用細胞工廠培養(yǎng)細胞時我們又該如何避坑呢?
1.細胞之間的接觸程度
正常細胞(二倍體)存在貼壁接觸抑制,長滿后細胞生長停止,而腫瘤細胞等非正常細胞,接觸抑制作用較弱,可生長至較高的細胞密度,但某些細胞過度生長,其損傷難以逆轉(zhuǎn),所以培養(yǎng)細胞時不建議細胞密度太高。
劃重點:一般使用細胞工廠培養(yǎng)細胞細胞匯合度達到70-80%即可傳代,切忌長得太滿。
2.細胞生長附著物
貼壁細胞在正常情況下都會貼壁,但一些細胞本身貼壁不牢或貼壁性差,這個時候包被附著物能夠促進細胞的黏附,所以在培養(yǎng)一些特殊細胞時,需要對細胞工廠進行包被后使用。常用的基質(zhì)有多聚賴氨酸(D型、L型)、明膠、膠原蛋白、細胞外基質(zhì)混合物,培養(yǎng)時可根據(jù)需要自行選擇。
劃重點:細胞工廠內(nèi)細胞貼壁差時可使用基質(zhì)包被細胞工廠。
3.培養(yǎng)基的pH值
大多數(shù)細胞系在細胞工廠培養(yǎng)時在pH7.4左右時生長最好,而常規(guī)培養(yǎng)基的指示劑為酚紅,所以多數(shù)情況下,我們所見的培養(yǎng)基都呈紅色,但不同培養(yǎng)基的顏色會有差異,例如DMEM比1640顏色深一點。在培養(yǎng)細胞時,也可以根據(jù)細胞工廠內(nèi)培養(yǎng)基的顏色判斷細胞狀態(tài),如隨著細胞生長,培養(yǎng)基顏色會變淺變黃。
劃重點:培養(yǎng)細胞時關(guān)注培養(yǎng)基顏色變化,發(fā)現(xiàn)異常及時處理。
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