細(xì)胞復(fù)蘇是與相反的過程，即是細(xì)胞恢復(fù)生長的過程，是將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)。那么細(xì)胞復(fù)蘇需要用到哪些細(xì)胞培養(yǎng)耗材，其步驟又是怎樣的呢？
細(xì)胞復(fù)蘇與細(xì)胞凍存不同，其過程升溫要快，防止在解凍過程中水分進(jìn)入細(xì)胞，形成冰晶，影響細(xì)胞存活。需要用到的細(xì)胞培養(yǎng)耗材包括 培養(yǎng)瓶、吸頭、凍存管、離心管、移液管等，復(fù)蘇步驟如下：
①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細(xì)胞死亡率，復(fù)蘇過程中一般細(xì)胞死亡率在20%～25%之間。
②迅速用擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。
③小心開啟瓶蓋，把細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有4mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，36℃～38℃培養(yǎng)1h，讓細(xì)胞貼壁。
④細(xì)胞貼壁后，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細(xì)胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細(xì)胞及其碎片，加5mL新鮮培養(yǎng)基，36℃～38℃培養(yǎng)。
⑤24h后，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直到形成單層，便可以傳代。
⑥詳細(xì)記錄復(fù)蘇細(xì)胞的名稱、數(shù)量、復(fù)蘇時間、存放部位等。
細(xì)胞復(fù)蘇時要注意無菌操作，所用到的細(xì)胞培養(yǎng)耗材需經(jīng)過滅菌處理，操作人員注意個人衛(wèi)生，避免污染細(xì)胞，影響細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)程。
