在利用細胞工廠進行細胞培養(yǎng)時,經(jīng)常會涉及到對細胞活力和增殖情況的測定,在諸多測定方法中,細胞計數(shù)法是常用的一種。
細胞計數(shù)法是利用血細胞計數(shù)板計量細胞懸液中細胞數(shù)量,從而推算細胞的增殖和鋪板密度的方法,簡單易操作,但是耗材時間較長,所需細胞量比較多。同時,由于是人工操作,這種計數(shù)方法存在一定的誤差。對細胞工廠中的細胞計數(shù),可以按照以下步驟操作:
1.準備適合該中細胞消化濃度的胰蛋白酶消化液,吸出培養(yǎng)基,加入消化液,在孵箱中消化適宜的時間,待細胞變圓后加入等量或大于消化液體積的培養(yǎng)基終止消化。離心后,用培養(yǎng)基制成細胞懸液;
2. 將蓋玻片放置在血細胞計數(shù)板中間處,用10ul小槍頭或者毛細吸管吸取少量的細胞懸液,然后將細胞懸液緩慢注入蓋玻片和計數(shù)板的接觸邊緣,虹吸作用會讓細胞懸液緩慢進入小室,充滿間隙;
3.用 100倍顯微鏡下觀察情況,計算中央方格和四個角落的方格中的細胞數(shù)量。原則是計左不計右,計上不計下,也就是說,計算壓在左邊中線和上邊中線的細胞,但是不計算右邊中線和下邊中線的細胞;
4. 使用后,用超純水和75%乙醇清洗干凈;
5. 細胞密度=平均細胞數(shù)*104*稀釋倍數(shù)(個/ml);
6. 細胞總數(shù)=細胞密度*細胞懸液體積(個)。
測定細胞工廠中的細胞生長狀況可以按照以上步驟操作,需要注意的是,如果顯微鏡下有兩個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算,如果細胞團過多,超過10%,則說明分散情況不好,需要重新制備細胞懸液進行測定。