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我們?cè)?/span>CHO懸浮細(xì)胞的發(fā)酵生產(chǎn)，需要做細(xì)胞株的傳代穩(wěn)定性，那么我們?cè)诩?xì)胞一般都會(huì)出現(xiàn)幾個(gè)疑問(wèn)，今天富道細(xì)胞來(lái)跟大家大概解答一下細(xì)胞搖瓶在CHO懸浮細(xì)胞的發(fā)酵生產(chǎn)的應(yīng)用。

1. 傳代穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)一般要傳多少代合適呢？

要根據(jù)以后的生產(chǎn)周期來(lái)決定的。譬如從復(fù)蘇細(xì)胞開(kāi)始到完成一批生產(chǎn)的時(shí)間是多少，穩(wěn)定性至少要大于這個(gè)時(shí)間吧。為了生產(chǎn)項(xiàng)目的可靠性建議做生產(chǎn)周期的兩倍穩(wěn)定性時(shí)間，這樣可以看出細(xì)胞株表達(dá)量的一個(gè)變化趨勢(shì)。細(xì)胞株會(huì)隨著傳代的時(shí)間變化呈一個(gè)下降趨勢(shì)的。

2. 檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)穩(wěn)定性，每一代細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)多長(zhǎng)時(shí)間取樣呢？是不是每代細(xì)胞都要補(bǔ)料培養(yǎng)半個(gè)月再測(cè)？

每一代都做沒(méi)有這個(gè)必要，做幾條能夠看到表達(dá)量穩(wěn)定的趨勢(shì)就行了（但也不能做兩三條這樣沒(méi)法看到趨勢(shì)的）。

3. 檢測(cè)細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性，需要提DNA那每一代細(xì)胞培養(yǎng)多長(zhǎng)時(shí)間取樣呢？

這個(gè)可以和第二點(diǎn)補(bǔ)料培養(yǎng)同周期做。

4. 有木有詳細(xì)點(diǎn)的傳代穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的protocl可以參考?。?/span>

穩(wěn)定性主要關(guān)注細(xì)胞株表達(dá)量是否穩(wěn)定，蛋白活性是否是穩(wěn)定的及細(xì)胞遺傳穩(wěn)定。這些都是為了說(shuō)明你以后生產(chǎn)時(shí)穩(wěn)定的。

5.如果用搖瓶做的話(huà)，那細(xì)胞都不用建庫(kù)了，直接接種到搖瓶里開(kāi)始fedbatch培養(yǎng)了？

即使用搖瓶也是要建庫(kù)的，穩(wěn)定性評(píng)估的是MCB和WCB庫(kù)，不是單純的評(píng)估細(xì)胞株的。