細胞培養(yǎng)瓶多用來培養(yǎng)貼壁細胞,這類細胞貼附在瓶子底部生長,當(dāng)細胞生長達到一定程度后,需要將細胞消化下來再進行后續(xù)操作。那我們該如何消化細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞呢?
由于貼壁細胞的生長特性,為了維持細胞良好的狀態(tài),我們需要借助特殊的溶液進行細胞消化,也就是胰酶。多數(shù)細胞消化的時候只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。
對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。
需要注意,不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般我們?nèi)庋塾^察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與細胞培養(yǎng)瓶材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了,這個時候應(yīng)該停止消化。
細胞消化的效果直接影響后續(xù)的細胞培養(yǎng)實驗,在消化細胞的時候我們要注意無菌操作,避免將外源污染引入細胞培養(yǎng)瓶,影響后續(xù)細胞生長。