傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。在懸浮細(xì)胞傳代中,細(xì)胞搖瓶是不可或缺的一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材。
細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴(lài)支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng),這類(lèi)細(xì)胞稱(chēng)為懸浮細(xì)胞,如淋巴細(xì)胞。懸浮細(xì)胞傳代步驟如下:
1.先將裝有細(xì)胞的細(xì)胞搖瓶從培養(yǎng)箱拿出,用酒精噴灑瓶身后將細(xì)胞搖瓶拿進(jìn)超凈臺(tái);
2. 打開(kāi)瓶蓋,用200 ul移液器取100~200 ul細(xì)胞放入1.5 mlEP管中,瓶蓋過(guò)火,擰緊,將培養(yǎng)瓶放回?fù)u床;
3.將200 ul細(xì)胞混勻,取10 ul細(xì)胞加入10 ul臺(tái)盼藍(lán),顯微鏡下計(jì)數(shù)。根據(jù)細(xì)胞數(shù)決定下游實(shí)驗(yàn);
4.細(xì)胞需計(jì)數(shù)兩次求平均值;
5.懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù);
6.根據(jù)不同細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)在合適的時(shí)間和密度給細(xì)胞接種傳代。
以上是細(xì)胞搖瓶在懸浮細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,這種耗材不止應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),在液體菌種制備中同樣具備廣泛的應(yīng)用,如雞腿菇、枯草芽孢桿菌、皺柄白馬鞍菌等,是一種經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的細(xì)胞培養(yǎng)工具。