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我們在使用細(xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材時(shí)，總會(huì)有一些需要注意的事項(xiàng)，今天富道細(xì)胞整合了一些資料跟大家分享一下我們在使用細(xì)胞工廠等耗材時(shí)需要的注意事項(xiàng)：

1、確保無菌操作：細(xì)菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因，必須加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主，因?yàn)橐坏┘?xì)胞工廠內(nèi)細(xì)胞污染，一般很難消除。

2、培養(yǎng)液：細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)所用的培養(yǎng)液必須滿足細(xì)胞生存和生長的必要條件。由于細(xì)胞來源的動(dòng)物種類、組織類型不同，對培養(yǎng)液的要求有一定的差異，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

3、血清選擇：一般血清選擇為小牛血清，此類血清對于維持培養(yǎng)細(xì)胞的生存和促進(jìn)細(xì)胞增殖起著關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的小牛血清進(jìn)行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號小牛血清后，就保持應(yīng)用至實(shí)驗(yàn)完成。

4、膠原酶溶液：必須新鮮配制，貯存時(shí)間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導(dǎo)致細(xì)胞工廠細(xì)胞消化時(shí)間過長，細(xì)胞損傷增加。

5、L-谷氨酰胺：幾乎所有細(xì)胞對谷氨酰胺都有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞工廠內(nèi)細(xì)胞會(huì)因生長不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時(shí)，就應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

6、靜置培養(yǎng)：原代細(xì)胞在消化分離后，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時(shí)72h)內(nèi)，應(yīng)處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時(shí)地取出培養(yǎng)瓶或者細(xì)胞工廠觀察生長狀況，這將使原代分離細(xì)胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必?fù)?dān)心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會(huì)消耗光，在細(xì)胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細(xì)胞貼壁伸展。

7、消化時(shí)間：一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可，因?yàn)榇藭r(shí)組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，過久的消化往往導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重，細(xì)胞培養(yǎng)成活率降低。

8、其他生長因子：經(jīng)過以上處理，一般原代分離細(xì)胞培養(yǎng)均可以成功。對于少數(shù)特殊類型細(xì)胞也可以考慮加一些特殊的生長因子，如胰島素能促使細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內(nèi)毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費(fèi)用較高。

這就是富道細(xì)胞整合之后在使用細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞之前需要注意的事項(xiàng)了。