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我們在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，為了減少細(xì)胞代謝從而達(dá)到長期儲(chǔ)存的目的，就會(huì)利用凍存管進(jìn)行細(xì)胞凍存，那么我們在后續(xù)使用到細(xì)胞的時(shí)候就需要進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇了，今天富道細(xì)胞就跟大家簡單分享一下凍存管復(fù)蘇細(xì)胞的流程，其中分為玻璃化凍存和非玻璃化凍存的兩種復(fù)蘇方式：

一、非玻璃化凍存的復(fù)蘇方法

1.調(diào)配370C～400C的溫水，或?qū)⒑銣厮∠涞臏囟日{(diào)節(jié)至370C～400C；

2.從液氮中取出凍存管，立即投入370C～400C溫水中迅速晃動(dòng)，直至凍存液完全溶解；

3.將細(xì)胞凍存懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，加入約5ml培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻；

4.將細(xì)胞懸液經(jīng)800～1000r/min離心5min，棄上清夜；

5.向細(xì)胞沉淀內(nèi)加入完全培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)足培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。

二、玻璃化凍存的復(fù)蘇方法

1.將凍存管從液氮中取出，立即投入冰浴中5min。復(fù)溫速率約5600C/min。一次可以進(jìn)行多個(gè)凍存管的復(fù)蘇；

2.將凍存管兩端剪斷，可以將5ml細(xì)胞凍存懸液轉(zhuǎn)移到50ml離心管中；

3.沿離心管壁緩慢加入已在冰浴中預(yù)冷的含20％胎牛血清的Hanks平衡鹽溶液。前10min以0.2ml/min的速度加入，后10min以0.5ml/min的速度加入，接著的15min以0.75ml/min的速度加入，最后30min以1ml/min的速度加入。全過程約為65min，都在冰浴中進(jìn)行；

4.將稀釋后的細(xì)胞懸液以400r/min離心5min，去除上清。向細(xì)胞沉淀中加入培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，用于培養(yǎng)。