細胞培養(yǎng)瓶多用于貼壁細胞的培養(yǎng),當細胞生長到一定程度后,需要將其消化下來,進行下一步的傳代或其他操作。由于是貼壁細胞,因此消化細胞時需要借助消化酶讓細胞從瓶壁脫落,具體的操作步驟如下:
1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
2、加入少量胰酶細胞消化液,略蓋過細胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細胞消化時間有所不同)。
3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察細胞培養(yǎng)瓶底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。
4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。
以上是細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞的消化步驟,在操作的時候我們要注意控制好消化時間,避免因為消化時間不足,未達到相應的消化效果;或因為消化過度,對細胞造成損傷,影響后期的細胞培養(yǎng)。
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